Interferencia de micobacterias no tuberculosas en pruebas oficiales de erradicación de la tuberculosis en España

El género Mycobacterium es muy grande y abarca 196 taxones infantiles diferentes con nombres correctos y publicados válidamente. Las micobacterias pueden asumir diferentes roles: existen patógenos animales y humanos de gran relevancia como M. bovis y M. caprae, miembros del complejo Mycobacterium tuberculosis (MTC) y los agentes causantes más comunes de la tuberculosis bovina (bTB), mientras que otras como las micobacterias no tuberculosas (MNT) suelen ser microorganismos de vida libre ampliamente distribuidos en el medio ambiente. Estas MNT se pueden encontrar en el suelo, el agua, el polvo, etc., pero en determinados casos, normalmente ligados a procesos inmunosupresores, pueden infectar a humanos y animales y actuar como patógenos oportunistas.

En el ganado vacuno, la infección por MNT no se ha asociado tradicionalmente con la presencia de signos clínicos (con la notable excepción de M. avium subsp. paratuberculosis, (Map), el agente causal de la paratuberculosis), aunque se ha descrito la presencia de lesiones granulomatosas como consecuencia de la infección.

Desde el inicio del establecimiento de programas de erradicación de la TB en diferentes regiones del mundo a principios del siglo XX, varios países han logrado erradicar la enfermedad. En otros, sin embargo, a pesar de todos los esfuerzos realizados, la enfermedad sigue siendo endémica. Según apuntan, "el fracaso de estos programas se ha atribuido en parte a las limitaciones en la sensibilidad y especificidad de las pruebas de diagnóstico existentes". Entre los factores que comprometen la realización de estas pruebas, las MNT se han relacionado repetidamente con la aparición de reacciones inespecíficas en las pruebas de tuberculina intradérmica únicas y comparativas, las principales herramientas de diagnóstico utilizadas como base de los programas de erradicación en todo el mundo.

REACCIONES CRUZADAS CON MICOBACTERIAS NO TUBERCULOSAS

La mayoría de los estudios que evalúan el papel de la MNT en los problemas de diagnóstico de la TBb se han centrado en los producidos por Map, lo que demuestra que puede afectar tanto a la especificidad como a la sensibilidad. Sin embargo, las MNT distintas de Map, también conocidas como atípicas o ambientales, también pueden afectar la confiabilidad de las pruebas de diagnóstico de TB debido a la aparición de reacciones cruzadas en animales libres de TB, mientras que su impacto en la sensibilidad de las pruebas aún están por cuantificar.

Varios estudios han identificado qué especies pueden estar asociadas más comúnmente con estas reacciones cruzadas en las pruebas de diagnóstico de TBb en diferentes entornos. Sin embargo, no todas las muestras evaluadas en estos estudios procedían de animales con resultados positivos o de granjas oficialmente libres de tuberculosis (OTF). Por ejemplo, en España, un estudio reciente que describe la presencia de MNT en animales incluyó sólo tres bovinos reactivos de rebaños OTF, y otros aislados procedían de rebaños en los que la enfermedad estaba presente, lo que hace que el papel de estas especies bacterianas en la aparición de infecciones cruzadas produzca reacciones poco claras.

Por tanto, el objetivo de un estudio realizado por investigadores del Centro de Vigilancia Sanitaria VISAVET, la Universidad Complutense de Madrid, del Servicio de Sanidad Animal, tanto de la Xunta de Galicia como del Principado de Asturias, y del Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación, ha sido identificar las especies asociadas a reacciones inespecíficas detectadas en el marco de la campaña de erradicación de la TB en España en una cohorte amplia (n = 373) de bovinos con reactores de prueba cutánea procedentes de rebaños OTF ubicados en zonas con diferente prevalencia de la enfermedad. Esta información puede ser útil para comprender mejor las principales especies que afectan la especificidad de las pruebas cutáneas para la TB y para evaluar la variabilidad geográfica en su aparición.

AISLADOS DE GRANJAS OFICIALMENTE LIBRES DE TUBERCULOSIS

Se evaluaron todos los aislados de MNT disponibles en el Centro de Vigilancia Sanitaria de VISAVET recuperados entre 2011 y 2020 de bovinos con prueba cutánea positiva ubicados en 359 rebaños de OTF detectados en el marco del programa de erradicación español. Los aislamientos se cultivaron directamente en VISAVET a partir de muestras de ganado recogidas en el matadero y analizadas en el laboratorio del mismo o se enviaron a laboratorios veterinarios oficiales ubicados en Asturias y Galicia, (72,1% de los rebaños), procediendo los animales restantes de la muestra de diferentes partes del país. Los laboratorios veterinarios remitieron los aislamientos a VISAVET para su identificación una vez que confirmaron que no pertenecían al complejo M. tuberculosis a excepción de la región OTF de Asturias, que presentó mayoritariamente aislados ya identificados como pertenecientes al complejo M. avium.

Al incluir solo aislamientos recuperados de animales positivos en rebaños OTF (que mantuvieron este estado durante al menos 3 años después de que se encontró el reactor), “intentamos minimizar la posibilidad de que los animales también pudieran haber sido infectados con un miembro del MTC”.

En este punto, los autores explican que según el programa de erradicación, cuando se identifica un animal positivo en una prueba cutánea en un rebaño OTF, el animal debe ser sacrificado en un plazo máximo de 15 días y se recolectan muestras de tejido en el matadero y se envían a un laboratorio autorizado para aislarlo o detectarlo en las muestras la presencia de miembros del MTC a través de bacteriología, y más recientemente PCR directa. El análisis bacteriológico de estas muestras “puede conducir en ocasiones a la identificación de especies de MNT, que se identifican como tales en el laboratorio según el siguiente protocolo”.

De los 308 aislamientos para los cuales se logró una identificación confiable, se identificaron 32 especies de micobacterias diferentes, siendo ciertas especies las más representadas las siguientes.

LA “QUINTA ESPECIE” MÁS ABUNDANTE, DESCONOCIDA

Por un lado, entre los miembros del complejo M. avium (n = 142, 46,1 %), los autores descubrieron que M. avium subsp. hominissuis (98; 69,0 %) fue el más abundante seguido de M. avium subsp. avium (33, 23,2 %) y M. intracelular (7, 4,9 %).

Asimismo, entre los miembros que no pertenecen al M. avium (n = 166, 53,9 %), M. nonchromogenicum (85; 27,6 %) y M. bourgelatii (11; 5,6 %) fueron las especies predominantes. Además, se obtuvieron resultados mixtos en 53 aislamientos que presentaban hasta 30 genotipos diferentes, “lo que podría ser indicativo de nuevas especies de micobacterias”.

Entre ellos, señalan que 10 aislados provenientes de rebaños de carne exhibieron secuencias idénticas en los cuatro genes secuenciados, lo que constituiría la quinta “especie” más común detectada en el estudio.

Ante estos hallazgos, los autores indican que “nuestro estudio demuestra que múltiples especies de MNT podrían estar asociadas con la aparición de reacciones no específicas en la prueba cutánea en ganado vacuno en España”.

En resumen, “nuestros resultados representan un primer paso hacia la caracterización de la diversidad de especies de MNT que podrían interferir con las pruebas de diagnóstico oficiales para la erradicación de la TB en España”, concluyen.